CTH CRISPR Activation Plasmid (m): sc-430767-ACT

Das murine Gen **Cth** kodiert die Cystathionin-γ-Lyase (CTH), ein pyridoxalphosphatabhängiges Enzym des Transsulfurierungswegs, das Cystathionin zu Cystein, α‑Ketobutyrat und Ammoniak umsetzt und zur zellulären Produktion von Schwefelwasserstoff (H₂S) beiträgt. Über die Regulation der Cysteinverfügbarkeit und der Redoxpufferung beeinflusst CTH den Glutathionstoffwechsel, Antworten auf oxidativen Stress, die Mitochondrienfunktion und die metabolische Homöostase. Eine veränderte CTH-Aktivität wurde mit Störungen im Stoffwechsel schwefelhaltiger Aminosäuren und einer H₂S-abhängigen Signalgebung in Verbindung gebracht, die Schnittstellen zu Entzündungswegen, der Gefäßbiologie und der Neurobiologie aufweist. Daher wird CTH häufig in Modellen für oxidativen Stress, metabolische Dysfunktion und Gewebeschädigung untersucht, um zu klären, wie Schwefelfluss den Zellzustand und Signalnetzwerke moduliert.

CTH Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Cth-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CTH Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Cth-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Cth-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CTH-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Cth-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CTH-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CTH-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Cth-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.