CSN8 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-430844

Descripción general

Cops8 codifica CSN8, una subunidad central del signalosoma COP9 que regula las ligasas E3 de ubiquitina tipo cullina-RING al controlar el estado de neddilación de las cullinas y, de este modo, influir en el recambio proteico dependiente de ubiquitina. A través de esta actividad, CSN8 contribuye a la proteostasis, la progresión del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN y la señalización adaptativa al estrés, modulando la estabilidad de proteínas reguladoras clave. La alteración de la función del signalosoma COP9 se ha vinculado con cambios en la señalización inflamatoria, un desarrollo y una homeostasis tisular afectados, y una apoptosis desregulada, lo que hace que Cops8 sea relevante para estudios mecanísticos de vías que acoplan la regulación de la ubiquitina con la aptitud celular. En modelos murinos, la perturbación de componentes del CSN se asocia con frecuencia a defectos en el control del crecimiento y la función de órganos, lo que respalda su uso para investigar fenotipos celulares relevantes para enfermedad sin implicar resultados terapéuticos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CSN8 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Cops8 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Cops8 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Cops8 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CSN8.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Cops8 para la investigación de la señalización de CSN8, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Cops8 críticos para la función de CSN8
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Cops8 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CSN8 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido CSN8 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Cops8. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CSN8 (m) y el plásmido HDR CSN8 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Cops8 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Cops8 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.