Plasmide Double Nickase (h) CSN1: sc-404934-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) CSN1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CSN1 Double Nickase (h) et le plasmide CSN1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GPS1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CSN1 Antibody (E-4): sc-514086
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) CSN1 | sc-404934-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) CSN1 | sc-404934-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **GPS1** code la sous-unité 1 du signalosome COP9 (CSN1), un composant central du signalosome COP9 qui régule les ubiquitine-ligases de type culline-RING en contrôlant la neddylation des cullines et en coordonnant le renouvellement des protéines dépendant de l’ubiquitine. Par cette activité, CSN1 influence la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN et la signalisation du stress, en recoupant des voies telles que **MAPK** et **NF-κB** qui façonnent les programmes transcriptionnels et la protéostasie. Une perturbation de la fonction du signalosome COP9 a été associée à une modification de la stabilité de régulateurs clés, notamment des cyclines et des facteurs de transcription, contribuant à une prolifération dérégulée et à une maintenance du génome altérée. **GPS1/CSN1** présente donc un intérêt pour des études mécanistiques en biologie du cancer, en signalisation liée à l’inflammation, et plus largement pour l’étude du contrôle de la voie ubiquitine–protéasome.
CSN1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GPS1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GPS1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GPS1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GPS1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.