Plasmide Double Nickase (h) CSA: sc-403428-NIC

ERCC8 code pour la protéine humaine CSA, un facteur à répétitions WD40 qui forme, avec DDB1, CUL4A et RBX1, le complexe ligase E3 d’ubiquitine CRL4^CSA afin de coordonner la réparation par excision de nucléotides couplée à la transcription (TC-NER). CSA contribue à résoudre les lésions qui bloquent l’ARN polymérase II en recrutant des activités de réparation et de remodelage de la chromatine et en favorisant le renouvellement, dépendant de l’ubiquitination, de composants de la réponse aux dommages. Par ces fonctions, CSA soutient la stabilité du génome, la reprise de la transcription après des dommages induits par les UV et le maintien de l’homéostasie cellulaire en situation de stress génotoxique. Des altérations pathogènes d’ERCC8 sont associées au syndrome de Cockayne de groupe A, un trouble de réparation de l’ADN utilisé comme modèle pour étudier les défauts de TC-NER, le stress transcriptionnel et la vulnérabilité du neurodéveloppement.

CSA Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ERCC8 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ERCC8. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ERCC8. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ERCC8.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.