Plasmide CRISPR/Cas9 KO cryptdin 3 (m): sc-419984

Présentation

Defa3 code la cryptdine 3, une α‑défensine dérivée des cellules de Paneth qui contribue à la défense immunitaire innée dans l’intestin grêle de la souris en ciblant directement les membranes microbiennes et en modulant la composition du microbiote intestinal. En tant qu’élément de la biologie des peptides antimicrobiens, la cryptdine 3 participe au maintien de la barrière épithéliale et à l’homéostasie immunitaire muqueuse, aux côtés des voies de reconnaissance des motifs et de signalisation inflammatoire. Des altérations de la production de défensines par les cellules de Paneth ont été associées à une dysbiose et à une inflammation intestinale, ce qui fait de Defa3 un gène pertinent pour des études mécanistiques des interactions hôte–microbe. La perturbation de Defa3 est également utile pour examiner comment les peptides antimicrobiens influencent la résistance à la colonisation bactérienne et les réponses de stress épithélial.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO cryptdin 3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Defa3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Defa3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Defa3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine cryptdin 3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Defa3 pour l'étude de la signalisation de cryptdin 3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Defa3 essentiels à la fonction de cryptdin 3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Defa3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le cryptdin 3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le cryptdin 3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Defa3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le cryptdin 3 plasmide HDR (m) et le cryptdin 3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Defa3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Defa3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.