Plasmide CRISPR/Cas9 KO CRSP130 (h): sc-406593

Présentation

MED23 code CRSP130, une sous-unité centrale du complexe Mediator qui fait le lien entre des facteurs de transcription spécifiques de séquence et l’ARN polymérase II, coordonnant l’initiation de la transcription et des programmes d’expression génique dépendants des signaux. CRSP130 contribue à intégrer des signaux régulateurs issus des voies du développement et des voies de réponse au stress afin de moduler l’activité des promoteurs et le contrôle transcriptionnel associé à la chromatine. Via une régulation Mediator-dépendante de vastes réseaux de gènes, MED23 a été associé dans la littérature à des modifications des états de croissance et de différenciation cellulaires ainsi qu’à des dérégulations des sorties transcriptionnelles observées dans de multiples contextes pathologiques. Son rôle central dans les circuits transcriptionnels fait de MED23 une cible utile pour disséquer la communication voie–promoteur et la dépendance aux facteurs de transcription dans des modèles de cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CRSP130 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MED23 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MED23, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MED23 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CRSP130.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MED23 pour l'étude de la signalisation de CRSP130, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MED23 essentiels à la fonction de CRSP130
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MED23 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CRSP130 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CRSP130 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MED23. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CRSP130 plasmide HDR (h) et le CRSP130 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MED23 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MED23 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.