Crossveinless-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406614
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Crossveinless-2 Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im Crossveinless-2-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Crossveinless-2: sc-377502
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Crossveinless-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) | sc-406614 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
BMPER kodiert das sezernierte extrazelluläre Matrix-Glykoprotein Crossveinless-2, einen kontextabhängigen Regulator der Bone-Morphogenetic-Protein(BMP)-Signalübertragung. Durch die Bindung von BMP-Liganden und die Modulation ihrer Verfügbarkeit für BMP-Rezeptoren beeinflusst BMPER SMAD-abhängige Transkriptionsprogramme, die das Verhalten von Endothelzellen, die Gewebemorphogenese und den Umbau der extrazellulären Matrix steuern. Die BMPER-Aktivität überschneidet sich mit Entwicklungsprozessen und Signalwegen der vaskulären Homöostase und wurde in der Literatur bei Störungen mit fehlregulierter angiogener Signalgebung sowie Bindegewebs-Phänotypen in Verbindung gebracht. Diese Eigenschaften machen BMPER zu einem nützlichen Ziel, um die Bildung von BMP-Gradienten, die Sequestrierung von Liganden und die Feinabstimmung des Signalwegs in Zell- und Organoidmodellen zu untersuchen.
Das Crossveinless-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des BMPER-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des BMPER-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von BMPER nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Crossveinless-2-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von BMPER-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Crossveinless-2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf BMPER-Exone abzielen, die für die Crossveinless-2-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere BMPER-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom Crossveinless-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Crossveinless-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des BMPER-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Crossveinless-2 HDR-Plasmid (h) und Crossveinless-2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von BMPER-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten BMPER-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.