Plasmide CRISPR d'Activation (h) Crk II: sc-402415-ACT

Le gène humain **CRK** code **Crk II**, une protéine adaptatrice contenant des domaines **SH2/SH3** qui relie des récepteurs phosphorylés sur des tyrosines et des protéines d’échafaudage à des complexes de signalisation en aval. Crk II coordonne l’assemblage de voies contrôlant la signalisation des intégrines, la dynamique des adhésions focales, le remodelage du cytosquelette d’actine et la migration cellulaire, via des interactions avec des partenaires tels que **p130CAS/BCAR1**, la **paxilline** et des modules **DOCK180/RAC1**. Ces réseaux intègrent des signaux issus des récepteurs à activité tyrosine kinase et des récepteurs d’adhérence afin de réguler la prolifération, la survie et la motilité directionnelle. Une dérégulation de la signalisation **CRK/Crk II** a été impliquée dans des phénomènes d’invasion et de métastase anormaux, ainsi que dans des réponses altérées aux signaux dépendants des facteurs de croissance et de l’adhérence dans le cancer et d’autres troubles prolifératifs.

Crk II Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CRK sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Crk II Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CRK dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CRK, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Crk II. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CRK natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Crk II au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Crk II dans les cellules tumorales présentant une expression de CRK silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.