Plásmido Doble Nickase (h) CRF-BP: sc-403849-NIC

CRHBP codifica la proteína de unión al factor liberador de corticotropina (CRF-BP), una glucoproteína secretada que se une a la CRH y a urocortinas relacionadas para regular la biodisponibilidad del ligando y su interacción con los receptores dentro del eje hipotálamo–hipófisis–suprarrenal (HPA). Al amortiguar los péptidos libres de la familia CRH, la CRF-BP modula las vías de señalización posteriores mediadas por CRHR1/CRHR2, que convergen en cAMP/PKA y en programas transcripcionales que controlan la respuesta al estrés, la secreción neuroendocrina y el tono inflamatorio. La expresión de CRHBP es prominente en el cerebro y en tejidos periféricos, donde puede influir en la comunicación neuroinmunitaria y la homeostasis endocrina. La desregulación de la señalización CRH–urocortina y de los patrones de expresión de CRHBP se ha asociado con fenotipos neuropsiquiátricos relacionados con el estrés, alteraciones de la regulación metabólica y procesos inflamatorios, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos de los circuitos del estrés y de la biología periférica de la CRF.

CRF-BP El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CRHBP en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CRHBP. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CRHBP. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CRHBP alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.