Plásmido CRISPR de Activación (h) CREST: sc-403134-ACT

SS18L1 (CREST) codifica un factor asociado a la cromatina, enriquecido en neuronas, que se integra con la regulación transcripcional y con programas de expresión génica dependientes de la actividad. CREST coopera con la maquinaria de remodelación de la cromatina, incluidos complejos relacionados con SWI/SNF, para modular los estados de promotores y potenciadores que influyen en la diferenciación neuronal, el crecimiento de neuritas y la función sináptica. A través de estos mecanismos epigenéticos, SS18L1 vincula la señalización neuronal con cambios a largo plazo en las redes transcripcionales y en la identidad celular. La desregulación de las vías asociadas a CREST se ha investigado en el contexto de procesos relevantes para enfermedades del neurodesarrollo y neurodegenerativas, incluidos cambios en la homeostasis sináptica y en la transcripción sensible al estrés.

CREST El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SS18L1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CREST El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SS18L1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SS18L1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CREST. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SS18L1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CREST en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CREST en células tumorales con expresión de SS18L1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.