CREM CRISPR Activation Plasmid (m): sc-419799-ACT

Mouse CREM (cAMP-responsive element modulator) ist ein bZIP-Transkriptionsfaktor der CREB/ATF-Familie, der an cAMP-Response-Elemente bindet und dadurch stimulusabhängige Genexpressionsprogramme reguliert. Durch die Integration von cAMP/PKA-Signalen, calciumabhängigen Inputs und MAPK-gekoppelten Phosphorylierungsereignissen beeinflusst CREM die Transkriptionsdynamik, die neuronale Plastizität, endokrine Outputs und Aktivierungszustände von Immunzellen prägt. Die Isoformvielfalt von CREM, einschließlich induzierbarer Aktivatoren und Repressoren wie ICER, ermöglicht eine kontextspezifische Steuerung von Immediate-Early- und metabolischen Gennetzwerken. Eine fehlregulierte CREM-Aktivität wurde in experimentellen Modellen mit veränderter Reproduktionsphysiologie, stressresponsiver Signalübertragung und immunvermittelter Pathologie in Verbindung gebracht, was seinen Nutzen für mechanistische Studien der Transkriptionskontrolle in krankheitsrelevanten Signalwegen unterstreicht.

CREM Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Crem-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CREM Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Crem-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Crem-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CREM-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Crem-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CREM-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CREM-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Crem-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.