CREB3L4 Double Nickase Plasmid (h): sc-417626-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CREB3L4 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CREB3L4 Double-Nickase-Plasmid (h) und CREB3L4 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CREB3L4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CREB3L4: sc-514052
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CREB3L4 Double Nickase Plasmid (h) | sc-417626-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CREB3L4 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-417626-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CREB3L4 (cAMP-responsive elementbindendes Protein 3-ähnlich 4) ist ein an die ER-Membran gebundener bZIP-Transkriptionsfaktor, der durch regulierte intramembranäre Proteolyse aktiviert werden kann, um Genexpressionsprogramme zu modulieren, die mit der Homöostase des sekretorischen Weges verknüpft sind. Es ist an zellulären Antworten beteiligt, die mit der ER-Stress-Signalgebung und transkriptionellen Netzwerken der Unfolded-Protein-Response (UPR) zusammenhängen, und beeinflusst Differenzierung sowie metabolische Anpassung. Die Aktivität von CREB3L4 wurde in hormonresponsiven Geweben und in Krebserkrankungen untersucht, wo eine veränderte Expression oder nachgeschaltete transkriptionelle Effekte mit Veränderungen in Proliferation, Überlebenssignalgebung und invasiven Phänotypen korrelieren können. Diese Eigenschaften machen CREB3L4 zu einem nützlichen Ziel, um Mechanismen der transkriptionellen Kontrolle zu untersuchen, die die ER-Funktion mit krankheitsassoziierten zellulären Zuständen verbinden.
CREB3L4 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CREB3L4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CREB3L4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CREB3L4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CREB3L4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.