Plasmide Double Nickase (h2) CRABP-I: sc-405485-NIC-2
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h2) CRABP-I correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CRABP-I Double Nickase (h2) et le plasmide CRABP-I Double Nickase (h22) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CRABP1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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Plasmide Double Nickase (h2) CRABP-I | sc-405485-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain CRABP1 code la protéine cellulaire de liaison à l’acide rétinoïque 1 (CRABP-I), un transporteur cytosolique à forte affinité qui séquestre et véhicule l’acide rétinoïque tout-trans, modulant ainsi sa disponibilité intracellulaire et sa signalisation spatio-temporelle. En modulant la distribution des rétinoïdes, CRABP-I influence des programmes transcriptionnels dépendants de l’acide rétinoïque, médiés par les récepteurs nucléaires (RAR/RXR), et affecte des processus tels que la différenciation, la prolifération et l’organisation du développement. Des altérations de l’homéostasie des rétinoïdes et de l’expression de CRABP1 ont été associées à une signalisation dérégulée dans le cancer et d’autres troubles liés au métabolisme de la vitamine A et aux états de différenciation cellulaire. Les études d’édition du gène CRABP1 et de perturbation de sa fonction permettent d’analyser les mécanismes des réseaux de signalisation des rétinoïdes, la dynamique de mise en tampon des ligands et les conséquences transcriptionnelles dans des modèles cellulaires humains pertinents.
CRABP-I Le plasmide double nickase (h2) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CRABP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CRABP1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CRABP1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CRABP1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.