CRABP-I Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419790

Panoramica

Crabp1 codifica la cellular retinoic acid–binding protein 1 (CRABP-I), un trasportatore intracellulare ad alta affinità che tampona e veicola l’acido retinoico tutto-trans, contribuendo a definire la disponibilità dei retinoidi nel citosol e nel nucleo. Modulando la ripartizione e il metabolismo dell’acido retinoico, CRABP-I influenza programmi trascrizionali dipendenti dall’AR che controllano decisioni sul destino cellulare, differenziamento e patterning tissutale. Nei sistemi murini, Crabp1 viene utilizzato per analizzare dinamiche di segnalazione dei retinoidi specifiche del contesto, distinte dall’attivazione canonica di RAR/RXR, incluse le interazioni con il catabolismo dell’AR e la responsività cellulare a segnali derivati dalla vitamina A. Un’alterata gestione dei retinoidi è ampiamente rilevante per fenotipi dello sviluppo e per la disregolazione, associata a malattie, di differenziamento e omeostasi, rendendo Crabp1 un nodo utile per studi di perturbazione a livello di via.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CRABP-I (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Crabp1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Crabp1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Crabp1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CRABP-I.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Crabp1 per lo studio della segnalazione di CRABP-I, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Crabp1 critici per la funzione di CRABP-I
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Crabp1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CRABP-I CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CRABP-I CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Crabp1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CRABP-I Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CRABP-I (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Crabp1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Crabp1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.