CRABP-I CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419790

Übersicht

Crabp1 kodiert das zelluläre Retinsäure-bindende Protein 1 (CRABP-I), einen intrazellulären Hochaffinitäts-Carrier, der all-trans-Retinsäure puffert und transportiert, um die Verfügbarkeit von Retinoiden im Zytosol und Zellkern zu steuern. Durch die Modulation von Verteilung und Metabolismus der Retinsäure beeinflusst CRABP-I RA-abhängige Transkriptionsprogramme, die Entscheidungen über Zellschicksal, Differenzierung und Gewebemusterung kontrollieren. In Mausmodellen wird Crabp1 genutzt, um kontextspezifische Dynamiken der Retinoid-Signalgebung zu untersuchen, die sich von der kanonischen RAR/RXR-Aktivierung unterscheiden, einschließlich Wechselwirkungen mit dem RA-Abbau und der zellulären Reaktionsfähigkeit auf aus Vitamin A abgeleitete Signale. Eine veränderte Retinoidverarbeitung ist breit relevant für Entwicklungsphänotypen und krankheitsassoziierte Fehlregulationen von Differenzierung und Homöostase, wodurch Crabp1 ein nützlicher Knotenpunkt für perturbationsbasierte Untersuchungen auf Signalweg-Ebene ist.

Das CRABP-I CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Crabp1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Crabp1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Crabp1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CRABP-I-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Crabp1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CRABP-I-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Crabp1-Exone abzielen, die für die CRABP-I-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Crabp1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CRABP-I CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom CRABP-I CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Crabp1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CRABP-I HDR-Plasmid (m) und CRABP-I HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Crabp1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Crabp1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.