CPS2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403519

Descripción general

CAD codifica un complejo enzimático citosólico multifuncional que cataliza los primeros pasos comprometidos de la biosíntesis de pirimidinas de novo; en este proceso, CPS2 (carbamoil‑fosfato sintetasa 2) inicia la conversión de la glutamina y el bicarbonato para la producción de UMP. Esta actividad sostiene la homeostasis del pool de nucleótidos necesaria para la replicación del ADN, la transcripción de ARN y la síntesis de fosfolípidos de membrana, vinculando la función de CAD con la progresión del ciclo celular y la adaptación metabólica. CAD está regulado por vías de señalización de nutrientes y de crecimiento, incluida la regulación alostérica por PRPP y la inhibición por retroalimentación por UTP, y es modulada por fosforilación aguas abajo de la señalización MAPK/mTOR. La desregulación del metabolismo de pirimidinas y la actividad alterada de CAD se han asociado con fenotipos proliferativos y con la reprogramación metabólica observada en múltiples contextos de enfermedad, lo que la convierte en un nodo útil para estudiar respuestas al estrés de nucleótidos y el mantenimiento del genoma.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CPS2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CAD en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CAD junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CAD tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CPS2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CAD para la investigación de la señalización de CPS2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CAD críticos para la función de CPS2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CAD para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CPS2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CPS2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CAD. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CPS2 (h) y el plásmido HDR CPS2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CAD para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CAD definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.