Plasmide CRISPR/Cas9 KO COPG (h): sc-404407

Présentation

COPG1 code la sous-unité gamma du complexe de coatomère I (COPI), un complexe de manteau cytosolique qui assure le bourgeonnement des vésicules et la sélection des cargos lors du transport rétrograde du Golgi vers le réticulum endoplasmique, ainsi qu’au sein des citernes golgiennes. COPG participe, avec d’autres sous-unités de COPI, à l’assemblage du manteau afin de réguler le trafic membranaire, l’organisation de l’appareil de Golgi et le retour des protéines résidentes du RE via des signaux de tri, contribuant ainsi à la maturation des protéines et à l’homéostasie de la voie de sécrétion. Une perturbation du trafic dépendant de COPI peut dérégler les réponses au stress du RE, la glycosylation et la protéostasie, reliant la fonction de COPG1 à des voies impliquées dans la croissance cellulaire, la différenciation et l’adaptation au stress. Des programmes de sécrétion et de trafic altérés sont fréquemment exploités dans des états pathologiques prolifératifs et immunitaires, ce qui fait de COPG1 un nœud pertinent pour des études mécanistiques du transport membranaire et de la dynamique des organites.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO COPG (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène COPG1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du COPG1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert COPG1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine COPG.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en COPG1 pour l'étude de la signalisation de COPG, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de COPG1 essentiels à la fonction de COPG
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de COPG1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le COPG plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le COPG plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus COPG1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le COPG plasmide HDR (h) et le COPG (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie COPG1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles COPG1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.