COPG Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404407

Panoramica

COPG1 codifica la subunità gamma del complesso proteico coatomer I (COPI), un complesso di rivestimento citosolico che media la gemmazione delle vescicole e la selezione del carico nel trasporto retrogrado dall’apparato di Golgi al reticolo endoplasmatico e tra le cisterne del Golgi. COPG partecipa all’assemblaggio del rivestimento insieme alle altre subunità di COPI per regolare il traffico di membrana, l’organizzazione del Golgi e il recupero delle proteine residenti nel RE tramite segnali di smistamento, sostenendo così la maturazione proteica e l’omeostasi della via secretoria. L’alterazione del traffico dipendente da COPI può perturbare le risposte allo stress del RE, la glicosilazione e la proteostasi, collegando la funzione di COPG1 a vie rilevanti per la crescita cellulare, la differenziazione e l’adattamento allo stress. Programmi secretori e di traffico alterati sono spesso sfruttati da stati patologici proliferativi e legati al sistema immunitario, rendendo COPG1 un nodo utile per studi meccanicistici sul trasporto di membrana e sulla dinamica degli organelli.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO COPG (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene COPG1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del COPG1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto COPG1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina COPG.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di COPG1 per lo studio della segnalazione di COPG, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni COPG1 critici per la funzione di COPG
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di COPG1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal COPG CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal COPG CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus COPG1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal COPG Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR COPG (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia COPG1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio COPG1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.