Plásmido Doble Nickase (h) COL6A3: sc-402899-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)COL6A3 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa COL6A3 (h) y el plásmido de doble nickasa COL6A3 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a COL6A3. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: COL6A3 Anticuerpo (A-5): sc-515335
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) COL6A3 | sc-402899-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) COL6A3 | sc-402899-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen humano **COL6A3** codifica la cadena α3 del colágeno tipo VI, un componente clave de la matriz extracelular que se ensambla en redes microfibrilares que sostienen la resistencia tensil de los tejidos y la mecanotransducción. COL6A3 contribuye a la adhesión célula–matriz, a la organización de la matriz y al diálogo con vías de señalización ligadas a integrinas y a TGF-β que influyen en la activación de fibroblastos, la miogénesis y la remodelación estromal. La alteración de la expresión de COL6A3 o de la deposición de matriz se asocia con fenotipos del tejido conectivo y neuromusculares, y se estudia con frecuencia en biología de la fibrosis y del microambiente tumoral, donde la composición de la matriz extracelular condiciona la migración y la diferenciación celulares. Como gen de matriz con una fuerte dependencia del contexto, COL6A3 se analiza habitualmente en sistemas de cultivo 3D, organoides y co-cultivos para desentrañar cambios en el comportamiento celular impulsados por la matriz extracelular.
COL6A3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus COL6A3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de COL6A3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de COL6A3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con COL6A3 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.