COL6A3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402899-ACT

COL6A3 kodiert die Alpha-3-Kette des Typ-VI-Kollagens, eine zentrale Komponente der extrazellulären Matrix, die sich zu perlschnurartigen Mikrofibrillen zusammensetzt und so die Gewebearchitektur sowie die Mechanotransduktion unterstützt. COL6A3-reiche Matrizen beeinflussen Zelladhäsion, Migration und Überlebenssignale über integrin- und fokale-Adhäsion-gekoppelte Signalwege und prägen dadurch die stromale Organisation und das extrazelluläre Remodeling. Eine dysregulierte COL6A3-Expression und Veränderungen des Kollagen-VI-Netzwerks sind mit fibroseähnlichen Remodeling-Programmen und Verschiebungen in der Zusammensetzung des Tumormikromilieus assoziiert; zudem wurden Varianten in Kollagen-VI-Genen mit erblichen Bindegewebs- und neuromuskulären Phänotypen in Verbindung gebracht. Als Matrix-Strukturgen mit Signalweg-Crosstalk wird COL6A3 häufig genutzt, um ECM-Zusammenbau, stromal-epitheliale Interaktionen und Remodeling-Reaktionen auf entzündliche oder mechanische Reize zu untersuchen.

COL6A3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen COL6A3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

COL6A3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des COL6A3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der COL6A3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen COL6A3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native COL6A3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von COL6A3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des COL6A3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem COL6A3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.