COL4A3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400903-ACT

COL4A3 kodiert die α3-Kette von Kollagen Typ IV, einer zentralen strukturellen Komponente von Basalmembranen, die zur Netzwerkassemblierung und zu gewebespezifischen Filtrationsbarrieren beiträgt. Im glomerulären Apparat der Niere stützen COL4A3-haltige Kollagen‑IV-Gerüste die Interaktionen zwischen Podozyten und Endothel, regulieren die Organisation der extrazellulären Matrix und beeinflussen Zelladhäsion sowie Mechanotransduktions-Signalwege über integrinverknüpfte Pathways. Eine veränderte COL4A3-Expression oder -Struktur beeinträchtigt die Integrität der Basalmembran und ist stark mit hereditären Nephropathien assoziiert, einschließlich Erkrankungen aus dem Alport-Spektrum und verwandten Pathologien der glomerulären Basalmembran. Da das Remodeling von Kollagen IV epitheliale und endotheliale Mikroumgebungen prägt, ist COL4A3 zudem relevant für Studien zu Fibrose, Matrixumsatz und Barrierefunktion in mehreren Organen.

COL4A3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen COL4A3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

COL4A3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des COL4A3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der COL4A3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen COL4A3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native COL4A3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von COL4A3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des COL4A3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem COL4A3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.