COL4A1 Double Nickase Plasmid (h): sc-401792-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das COL4A1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- COL4A1 Double-Nickase-Plasmid (h) und COL4A1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf COL4A1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: COL4A1: sc-517572
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
COL4A1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401792-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
COL4A1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401792-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
COL4A1 kodiert die Alpha-1-Kette von Kollagen Typ IV, einem zentralen strukturellen Bestandteil von Basalmembranen, der sich zusammen mit COL4A2 zu Kollagen-IV-Netzwerken assemblieren lässt, um die Gewebeintegrität und die Stabilität der Mikrovaskulatur zu unterstützen. Dieses extrazelluläre Matrixgerüst trägt dazu bei, Zell–Matrix-Interaktionen zu organisieren, die die Polarität von Epithel- und Endothelzellen prägen, die Permeabilität regulieren und die Mechanotransduktion über integrinverknüpfte Signalwege beeinflussen. Die Funktion von COL4A1 steht in Zusammenhang mit dem Aufbau der Basalmembran, der Organisation der extrazellulären Matrix und angiogenen Programmen, die die Gefäßreifung und die Gewebehomöostase beeinflussen. Eine Fehlregulation oder pathogene Variation in COL4A1 ist mit Small-Vessel-Pathologien und multisystemischen Basalmembran-Defekten assoziiert und macht COL4A1 zu einem relevanten Ziel für die Untersuchung von Gefäßbiologie, Barrierefunktion und matrixabhängigen zellulären Phänotypen.
COL4A1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des COL4A1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von COL4A1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die COL4A1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit COL4A1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.