Plasmide Double Nickase (h) COL3A1: sc-400356-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) COL3A1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide COL3A1 Double Nickase (h) et le plasmide COL3A1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant . Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: COL3A1 Antibody (B-10): sc-271249
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) COL3A1 | sc-400356-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) COL3A1 | sc-400356-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
COL3A1 code la chaîne pro-α1 du collagène de type III, un collagène fibrillaire majeur qui s’assemble en fibres de la matrice extracellulaire et contribue à déterminer la compliance des tissus ainsi que leur résistance à la traction. Le collagène de type III est abondant dans les parois vasculaires, la peau, le poumon et les organes creux, où il coordonne l’organisation de la matrice avec la signalisation cellule–matrice via les intégrines et les enzymes de remodelage de la MEC. La fonction de COL3A1 s’inscrit à l’interface de l’assemblage de la matrice extracellulaire, des programmes fibrogènes régulés par le TGF-β et des processus de réparation tissulaire qui modulent l’activation des fibroblastes et la mécanotransduction. Une expression ou une structure de COL3A1 dérégulée est associée à des phénotypes de fragilité des tissus conjonctifs et des vaisseaux, et COL3A1 est fréquemment étudié dans le contexte du remodelage lié à la fibrose et du renouvellement de la matrice extracellulaire.
COL3A1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de . Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de . En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de .
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.