COL15A1 Double Nickase Plasmid (h): sc-404027-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das COL15A1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- COL15A1 Double-Nickase-Plasmid (h) und COL15A1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf COL15A1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
COL15A1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404027-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
COL15A1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404027-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
COL15A1 kodiert die Kollagen‑Typ‑XV‑Alpha‑1‑Kette, ein nichtfibrilläres, mit der Basalmembran assoziiertes Kollagen, das zur Organisation der extrazellulären Matrix (EZM) sowie zur mechanischen Stabilität mikrovasculärer und perizellulärer Nischen beiträgt. COL15A1 unterstützt die Zell‑Matrix‑Adhäsion, reguliert die Gewebearchitektur und beeinflusst Prozesse wie Angiogenese und stromales Remodeling über integrinvermittelte Signalwege und den Aufbau der Basalmembran. Veränderte COL15A1‑Expression und eine veränderte EZM‑Zusammensetzung werden mit fibroseassoziiertem Remodeling sowie mit der Biologie des Tumormikromilieus in Verbindung gebracht, wo Kollagennetzwerke Invasion, vaskuläre Integrität und Zellmigration modulieren können. Als Matrixbestandteil mit kontextabhängiger Expression wird COL15A1 häufig genutzt, um das Zusammenspiel zwischen EZM und Zellen sowie die nischenabhängige Regulation epithelialer und endothelialer Phänotypen zu untersuchen.
COL15A1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des COL15A1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von COL15A1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die COL15A1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit COL15A1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.