COL11A1 Double Nickase Plasmid (h): sc-403512-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das COL11A1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- COL11A1 Double-Nickase-Plasmid (h) und COL11A1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf COL11A1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
COL11A1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403512-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
COL11A1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403512-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
COL11A1 kodiert die α1‑Kette des Kollagens Typ XI, eines mengenmäßig untergeordneten, funktionell jedoch wichtigen fibrillären Kollagens, das gemeinsam mit Kollagen Typ II assembliert, um den Durchmesser, die Abstände und die Zugfestigkeit von Kollagenfibrillen in der extrazellulären Matrix zu regulieren. Das Gen ist hochrelevant für die Biologie von Knorpel und Bindegewebe, wo es zur Matrixorganisation, zur Chondrozytendifferenzierung und zu mechanotransduktionsbezogenen Signalwegen beiträgt. Veränderte COL11A1‑Expression oder Sequenzvarianten wurden mit Phänotypen des Umbaus der extrazellulären Matrix und mit Bindegewebserkrankungen in Verbindung gebracht; zudem wird COL11A1 häufig im Kontext stromaler Signaturen und der Desmoplasie im Tumormikromilieu untersucht. Als strukturelles ECM‑Gen bietet COL11A1 einen gut zugänglichen Ansatzpunkt zur Untersuchung matrixabhängiger Signalwege, einschließlich integrinvermittelter Adhäsion, Dynamik fokaler Adhäsionen und TGF‑β‑assoziierter Remodeling‑Programme.
COL11A1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des COL11A1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von COL11A1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die COL11A1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit COL11A1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.