COG4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-416653

Panoramica

COG4 codifica una subunità centrale del complesso di tethering COG (Conserved Oligomeric Golgi), un complesso conservato che mantiene l’architettura del Golgi e coordina il traffico vescicolare retrogrado all’interno delle cisterne del Golgi. Regolando l’attracco delle vescicole e la fusione dipendente dalle SNARE, COG4 favorisce il riciclo degli enzimi della glicosilazione e il corretto processamento delle proteine secrete e di membrana lungo l’intero sistema endomembranoso. L’alterazione della funzione del complesso COG perturba il trasporto Golgi-RE e quello intra-Golgi, causando modifiche della glicosilazione proteica e ampi effetti su secrezione, maturazione dei recettori e composizione di membrana. Varianti in COG4 e in altri componenti del complesso COG sono associate a disturbi congeniti della glicosilazione e a fenotipi neuroevolutivi, rendendo questo gene rilevante per lo studio dei meccanismi di malattia legati al traffico nel Golgi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO COG4 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene COG4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del COG4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto COG4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina COG4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di COG4 per lo studio della segnalazione di COG4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni COG4 critici per la funzione di COG4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di COG4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal COG4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal COG4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus COG4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal COG4 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR COG4 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia COG4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio COG4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.