COG4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-416653

Descripción general

COG4 codifica una subunidad central del complejo de anclaje COG (conserved oligomeric Golgi), conservado evolutivamente, que mantiene la arquitectura del aparato de Golgi y coordina el tráfico vesicular retrógrado dentro de la pila del Golgi. Al regular el acoplamiento de vesículas y la fusión dependiente de SNARE, COG4 favorece el reciclaje de enzimas de glicosilación y el procesamiento adecuado de proteínas secretoras y de membrana en todo el sistema endomembranoso. La alteración de la función del complejo COG perturba el transporte del Golgi al retículo endoplásmico (RE) y el transporte intra-Golgi, lo que conduce a cambios en la glicosilación de proteínas y a efectos amplios sobre la secreción, la maduración de receptores y la composición de membranas. Variantes en COG4 y en otros componentes relacionados del complejo COG se asocian con trastornos congénitos de la glicosilación y fenotipos del neurodesarrollo, lo que hace que este gen sea relevante para estudiar mecanismos de enfermedad vinculados al tráfico del Golgi.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO COG4 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen COG4 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del COG4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de COG4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína COG4.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en COG4 para la investigación de la señalización de COG4, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de COG4 críticos para la función de COG4
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de COG4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido COG4 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido COG4 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus COG4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR COG4 (h) y el plásmido HDR COG4 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología COG4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana COG4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.