Plasmide Double Nickase (h) CNPase: sc-402463-NIC

Le gène humain **CNP** code la **2′,3′-phosphodiestérase des nucléotides cycliques 3′** (CNPase), une enzyme associée à la myéline, fortement exprimée dans les oligodendrocytes et les cellules de Schwann, qui hydrolyse les nucléotides cycliques 2′,3′ en nucléotides 2′. La CNPase contribue à la formation et au maintien de la gaine de myéline en influençant l’allongement des prolongements oligodendrogliaux, la dynamique du cytosquelette et le trafic de ribonucléoprotéines associées à l’ARN au niveau de la membrane plasmique. Par ces fonctions, la CNPase participe aux interactions axone–glie et à la stabilité des domaines de myéline compacts et non compacts dans le système nerveux. Des altérations de l’expression de **CNP** ou de l’activité de la CNPase ont été associées à la démyélinisation, aux dysfonctionnements de la substance blanche et à des contextes neuro-inflammatoires, ce qui rend cette voie pertinente pour des études mécanistiques de l’intégrité de la myéline et de la stabilité des circuits neuronaux.

CNPase Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CNP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CNP. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CNP. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CNP.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.