Plasmide CRISPR/Cas9 KO CNOX (h): sc-412433

Présentation

ENOX1 code l’échangeur disulfure–thiol ecto-NOX CNOX, une oxydoréductase associée à la membrane plasmique qui couple l’échange des ponts disulfure des protéines à l’oxydation du NADH et contribue à l’homéostasie rédox à la surface cellulaire. L’activité d’ENOX1 a été associée à la régulation du transfert d’électrons extracellulaire, à la modulation de l’équilibre des espèces réactives de l’oxygène (ROS) et à la coordination de processus rédox oscillatoires liés à la croissance, susceptibles d’influencer la prolifération et l’adaptation métabolique. En raison de ses rôles dans la signalisation rédox et le transport d’électrons associé à la membrane, ENOX1 est étudié dans les contextes des réponses au stress oxydatif, de la biologie vasculaire et de phénotypes cellulaires associés à une régulation rédox altérée. Une expression ou une activité d’ENOX1 dérégulée a été rapportée dans de multiples programmes transcriptionnels associés à des maladies, ce qui étaye son utilité comme nœud mécanistique pour l’étude de la signalisation dépendante du rédox et de la reprogrammation métabolique dans les cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CNOX (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ENOX1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ENOX1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ENOX1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CNOX.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ENOX1 pour l'étude de la signalisation de CNOX, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ENOX1 essentiels à la fonction de CNOX
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ENOX1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CNOX plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CNOX plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ENOX1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CNOX plasmide HDR (h) et le CNOX (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ENOX1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ENOX1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.