Plásmido Doble Nickase (h) CNG-1: sc-403946-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)CNG-1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa CNG-1 (h) y el plásmido de doble nickasa CNG-1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CNGA1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) CNG-1 | sc-403946-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) CNG-1 | sc-403946-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CNGA1 codifica la subunidad alfa del canal de nucleótidos cíclicos regulado por cGMP de los bastones (CNG-1), un efector clave de la cascada de fototransducción en los fotorreceptores tipo bastón de la retina. CNG-1 forma un canal catiónico regulado por cGMP que conecta los cambios de cGMP inducidos por la luz con el potencial de membrana, controlando la entrada de Na⁺/Ca²⁺ y la señalización posterior dependiente de Ca²⁺ que modula la adaptación visual y la recuperación. A través de esta vía, CNGA1 se integra con el metabolismo de cGMP y los procesos de homeostasis de Ca²⁺ que mantienen la función de los bastones en la visión con poca luz. La alteración genética o disfunción de CNGA1 se asocia con fenotipos de degeneración retiniana hereditaria, lo que respalda su relevancia para estudios mecanísticos de la fisiología de los bastones y de cambios de señalización relacionados con la enfermedad.
CNG-1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CNGA1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CNGA1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CNGA1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CNGA1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.