Plasmide Double Nickase (h) CLS1: sc-407799-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) CLS1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CLS1 Double Nickase (h) et le plasmide CLS1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CRLS1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CLS1 Antibody (E-8): sc-514986
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) CLS1 | sc-407799-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) CLS1 | sc-407799-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CRLS1 code la cardiolipine synthase 1 (CLS1), une enzyme de la membrane interne mitochondriale qui catalyse la dernière étape de la biosynthèse de la cardiolipine à partir du phosphatidylglycérol et du CDP‑diacylglycérol. La cardiolipine est un phospholipide caractéristique indispensable à l’organisation et à la stabilité des complexes de phosphorylation oxydative, au maintien de l’architecture des crêtes mitochondriales et à une production efficace d’ATP mitochondrial. Par son rôle dans le remodelage des lipides mitochondriaux et le fonctionnement de la chaîne respiratoire, CLS1 influence la signalisation de l’apoptose, la mitophagie et les réponses cellulaires au stress métabolique. Les altérations de l’homéostasie de la cardiolipine et la baisse de la bioénergétique mitochondriale liées à un dysfonctionnement de CRLS1 sont pertinentes pour l’étude de la physiopathologie neuromusculaire et cardiométabolique, ainsi que de mécanismes plus larges des maladies mitochondriales.
CLS1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CRLS1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CRLS1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CRLS1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CRLS1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.