CLN1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422390

Descripción general

Ppt1 codifica la palmitoil-proteína tioesterasa 1 (CLN1), una enzima lisosomal despalmitoilante que elimina grupos acilo grasos unidos por tioéster de proteínas S‑palmitoiladas, facilitando su recambio y tráfico. Mediante la regulación de la proteostasis lisosomal, el reciclaje de proteínas de membrana y el manejo de lípidos, CLN1 sostiene la homeostasis neuronal y se integra con las vías de autofagia–lisosoma. La pérdida de actividad de CLN1 se asocia con la biología de la lipofuscinosis ceroidea neuronal, caracterizada por una degradación lisosomal deficiente y la acumulación de material de depósito en tejidos posmitóticos. En modelos murinos, la alteración de Ppt1 ofrece un modelo manejable para estudiar cómo la despalmitoilación alterada afecta el mantenimiento sináptico, la señalización neuroinflamatoria y el control de calidad dependiente de lisosomas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CLN1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ppt1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ppt1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ppt1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CLN1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ppt1 para la investigación de la señalización de CLN1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Ppt1 críticos para la función de CLN1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ppt1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CLN1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido CLN1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ppt1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CLN1 (m) y el plásmido HDR CLN1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ppt1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ppt1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.