CLN1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422390

Panoramica

Ppt1 codifica la palmitoil-proteina tioesterasi 1 (CLN1), un enzima lisosomiale depalmitoilante che rimuove gruppi acilici di acidi grassi legati tramite tioestere dalle proteine S‑palmitoilate, facilitandone il turnover e il traffico intracellulare. Attraverso la regolazione della proteostasi lisosomiale, del riciclo delle proteine di membrana e della gestione dei lipidi, CLN1 sostiene l’omeostasi neuronale e si interseca con le vie autofagia–lisosoma. La perdita dell’attività di CLN1 è associata alla biologia della ceroido-lipofuscinosi neuronale, caratterizzata da degradazione lisosomiale compromessa e accumulo di materiale di deposito nei tessuti post-mitotici. Nei modelli murini, l’alterazione di Ppt1 offre un sistema gestibile per studiare come la depalmitoilazione disfunzionale influenzi il mantenimento sinaptico, la segnalazione neuroinfiammatoria e il controllo di qualità dipendente dai lisosomi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CLN1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ppt1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ppt1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ppt1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CLN1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ppt1 per lo studio della segnalazione di CLN1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ppt1 critici per la funzione di CLN1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ppt1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CLN1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CLN1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ppt1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CLN1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CLN1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ppt1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ppt1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.