CLK2 Lentiviral Activation Particles (h): sc-403326-LAC

Die humane CDC-like Kinase 2 (CLK2) ist eine dualspezifische Serin/Threonin-Kinase, die SR-reiche Spleißfaktoren phosphoryliert und dadurch die Dynamik des Spleißosoms sowie das alternative prä-mRNA-Spleißen koordiniert. Die Aktivität von CLK2 verknüpft die Transkription mit der RNA-Prozessierung und trägt zur Regulation der Zellzyklusprogression sowie stressantwortabhängiger Signalübertragung bei, einschließlich Signalwegen, die den RNA-Stoffwechsel und Kinase-Netzwerke modulieren. Eine dysregulierte CLK2-Expression oder -Signalübertragung wurde mit aberranten Spleißprogrammen in Verbindung gebracht, wie sie bei Krebs und anderen Erkrankungen mit gestörter Kontrolle der Genexpression beobachtet werden. Da Spleißentscheidungen die Vielfalt des Proteoms prägen, wird CLK2 häufig untersucht, um zu verstehen, wie phosphorylierungsabhängige Spleißregulation den zellulären Phänotyp beeinflusst.

CLK2 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente CLK2-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

CLK2 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der CLK2-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen CLK2-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen CLK2-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.