CLK2 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-403326-LAC

La chinasi 2 simile alla CDC umana (CLK2) è una chinasi a doppia specificità serina/treonina che fosforila fattori di splicing ricchi in SR, coordinando la dinamica dello spliceosoma e lo splicing alternativo del pre‑mRNA. L’attività di CLK2 collega la trascrizione all’elaborazione dell’RNA e contribuisce alla regolazione della progressione del ciclo cellulare e della segnalazione in risposta allo stress, incluse vie che modulano il metabolismo dell’RNA e le reti di chinasi. Una deregolazione dell’espressione o della segnalazione di CLK2 è stata associata a programmi di splicing aberranti osservati nel cancro e in altri disturbi caratterizzati da un controllo alterato dell’espressione genica. Poiché le decisioni di splicing determinano la diversità del proteoma, CLK2 è spesso studiata per comprendere come la regolazione dello splicing dipendente dalla fosforilazione influenzi il fenotipo cellulare.

Le particelle di attivazione lentivirale CLK2 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di CLK2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale CLK2 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione CLK2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di CLK2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo CLK2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.