Plasmide CRISPR/Cas9 KO CLEC-3A (h): sc-417520

Présentation

CLEC3A code pour CLEC-3A, une protéine sécrétée contenant un domaine de lectine de type C, impliquée dans l’organisation de la matrice extracellulaire et la communication cellule–matrice. CLEC-3A a été associée à la modulation des interactions avec le collagène et à des processus de remodelage tissulaire qui recoupent l’adhésion, la migration et la signalisation du microenvironnement inflammatoire. Dans les tissus humains, des altérations de l’expression de CLEC3A ont été rapportées dans des contextes de fibrose, de réparation des plaies et de stroma associé aux tumeurs, ce qui soutient son utilisation comme marqueur et nœud mécanistique dans des phénotypes pilotés par le remodelage. Ces propriétés rendent CLEC3A pertinent pour étudier comment des protéines de type lectine façonnent des signaux extracellulaires influençant le comportement épithélio-mésenchymateux et le trafic des cellules immunitaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CLEC-3A (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CLEC3A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CLEC3A, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CLEC3A à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CLEC-3A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CLEC3A pour l'étude de la signalisation de CLEC-3A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CLEC3A essentiels à la fonction de CLEC-3A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CLEC3A pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CLEC-3A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CLEC-3A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CLEC3A. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CLEC-3A plasmide HDR (h) et le CLEC-3A (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CLEC3A pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CLEC3A définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.