CLC-7 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404550

Descripción general

CLCN7 codifica CLC-7, un antiportador Cl⁻/H⁺ dependiente de voltaje localizado predominantemente en endosomas tardíos y lisosomas, donde contribuye a la acidificación de estos orgánulos y al mantenimiento de la homeostasis iónica. Al acoplar el flujo de cloruro al gradiente de protones generado por la V-ATPasa, CLC-7 regula la capacidad degradativa lisosomal, el tráfico endolisosomal y la función de la vía de autofagia-lisosoma. La actividad de CLCN7 es especialmente importante en los osteoclastos para la acidificación de la laguna de resorción y el recambio de la matriz ósea, y la alteración de la fisiología lisosomal dependiente de CLC-7 se asocia con fenotipos esqueléticos y neurodegenerativos. Estas propiedades hacen de CLCN7 una diana útil para estudiar la biología del lisosoma, el transporte iónico en membranas intracelulares y las contribuciones específicas de cada tipo celular a la homeostasis tisular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CLC-7 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CLCN7 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CLCN7 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CLCN7 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CLC-7.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CLCN7 para la investigación de la señalización de CLC-7, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CLCN7 críticos para la función de CLC-7
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CLCN7 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CLC-7 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CLC-7 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CLCN7. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CLC-7 (h) y el plásmido HDR CLC-7 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CLCN7 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CLCN7 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.