CLC-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405071

Descripción general

CLCN1 codifica el canal de cloruro CLC-1 del músculo esquelético, dependiente de voltaje, un determinante clave de la repolarización de la membrana y de la estabilidad eléctrica al proporcionar una alta conductancia basal al cloruro. Al limitar el disparo repetitivo de potenciales de acción y modular la excitabilidad, CLC-1 favorece el acoplamiento excitación–contracción normal y la homeostasis de las fibras musculares. La actividad de CLCN1 está regulada por el voltaje, el cloruro intracelular y señales que modifican la compuerta del canal, lo que lo vincula con la fisiología del transporte iónico y el estado metabólico. Las variantes patogénicas o la desregulación de CLCN1 se asocian estrechamente con la miotonía y fenotipos neuromusculares relacionados caracterizados por una relajación muscular alterada.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CLC-1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CLCN1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CLCN1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CLCN1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CLC-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CLCN1 para la investigación de la señalización de CLC-1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CLCN1 críticos para la función de CLC-1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CLCN1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CLC-1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CLC-1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CLCN1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CLC-1 (h) y el plásmido HDR CLC-1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CLCN1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CLCN1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.