CKR-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419701

Panoramica

Ccr1 codifica il recettore per chemochine CKR-1 (CCR1), un recettore accoppiato a proteine G che lega chemochine CC infiammatorie per controllare la chemiotassi, l’adesione e l’infiltrazione tissutale dei leucociti. La segnalazione di CKR-1 coinvolge proteine G eterotrimeriche per attivare flussi di calcio, cascate MAPK/ERK e vie dipendenti da PI3K che coordinano il rimodellamento del citoscheletro e la migrazione direzionale. Nei compartimenti immunitari del topo, Ccr1 contribuisce al traffico di monociti/macrofagi e neutrofili e modella circuiti infiammatori guidati dalle citochine. Un’attività di CCR1 deregolata è stata associata a modelli di patologie infiammatorie e simil-autoimmuni ed è stata studiata in contesti che includono infezione, fibrosi e reclutamento mieloide associato ai tumori.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CKR-1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ccr1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ccr1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ccr1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CKR-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ccr1 per lo studio della segnalazione di CKR-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ccr1 critici per la funzione di CKR-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ccr1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CKR-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CKR-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ccr1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CKR-1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CKR-1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ccr1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ccr1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.