Plasmide CRISPR d'Activation (m) CIITA: sc-419390-ACT

Le gène murin **Ciita** code **CIITA**, un coactivateur transcriptionnel maître indispensable à l’expression des gènes du complexe majeur d’histocompatibilité de classe II (CMH II) et à la présentation d’antigènes dans les cellules présentatrices d’antigènes professionnelles. CIITA intègre les signaux de l’interféron‑γ et d’autres voies de signalisation immunitaire afin de coordonner des programmes transcriptionnels qui façonnent l’activation de l’immunité adaptative, l’amorçage des lymphocytes T et les réponses inflammatoires. Une activité altérée de CIITA affecte la régulation de la voie du CMH II et est fréquemment étudiée dans des contextes de dérégulation immunitaire, d’interactions hôte‑pathogène et de remodelage du microenvironnement tumoral‑immunitaire. En tant que nœud central de la présentation d’antigènes, CIITA constitue un point d’entrée fonctionnel pour disséquer le contrôle transcriptionnel des réseaux de gènes immunitaires.

CIITA Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Ciita sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CIITA Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Ciita dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Ciita, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CIITA. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Ciita natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CIITA au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CIITA dans les cellules tumorales présentant une expression de Ciita silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.