CHSY3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-429749

Übersicht

Chsy3 kodiert die Chondroitinsulfat-Synthase 3 (CHSY3), eine im Golgi-Apparat lokalisierte Glykosyltransferase, die an der Verlängerung von Chondroitinsulfat-Glykosaminoglykan-Ketten auf Proteoglykanen beteiligt ist. Durch die Koordination mit anderen Chondroitin-Polymerasen und Sulfotransferasen beeinflusst CHSY3 die Organisation der extrazellulären Matrix, die Bindung/Sequestrierung von Wachstumsfaktoren sowie die Zell-Matrix-Signalübertragung, die Gewebemorphogenese und Homöostase prägen. In Mausmodellen kann eine veränderte Zusammensetzung von Chondroitinsulfat die Knorpel- und Skelettentwicklung, die neuronale Plastizität und entzündliche Mikroumgebungen beeinflussen, indem proteoglykanabhängige Signalwege moduliert werden. Daher ist Chsy3 für mechanistische Studien zum Umbau der extrazellulären Matrix und zur Proteoglykan-Biologie in Modellen muskuloskelettaler und neurobiologischer Phänotypen relevant.

Das CHSY3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Chsy3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Chsy3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Chsy3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CHSY3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Chsy3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CHSY3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Chsy3-Exone abzielen, die für die CHSY3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Chsy3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CHSY3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom CHSY3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Chsy3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CHSY3 HDR-Plasmid (m) und CHSY3 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Chsy3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Chsy3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.