ChREBP Plasmide Double Nickase (h): sc-401803-NIC

MLXIPL codifica la proteina legante l’elemento di risposta ai carboidrati (ChREBP), un fattore di trascrizione sensibile al glucosio che collega la disponibilità di carboidrati all’espressione di geni lipogenici e glicolitici. In risposta ai segnali metabolici, ChREBP coopera con cofattori come MLX per regolare promotori contenenti elementi di risposta ai carboidrati, integrando il rilevamento dei nutrienti con il controllo trascrizionale del metabolismo epatico e adiposo. Questo asse regolatorio contribuisce a vie che governano la lipogenesi de novo, la sintesi dei trigliceridi e l’omeostasi del glucosio, collegando l’attività di ChREBP al rimodellamento metabolico in condizioni di eccesso di nutrienti. Un’alterata segnalazione MLXIPL/ChREBP è stata associata a insulino-resistenza, fenotipi di fegato grasso e a meccanismi più ampi di malattia cardiometabolica, rendendolo un nodo rilevante per lo studio delle reti geniche metaboliche.

ChREBP Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MLXIPL nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MLXIPL. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MLXIPL. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MLXIPL interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.