ChREBP Double Nickase Plasmid (h): sc-401803-NIC

MLXIPL kodiert das Carbohydrate Response Element–Binding Protein (ChREBP), einen glukoseabhängigen Transkriptionsfaktor, der die Verfügbarkeit von Kohlenhydraten mit der Expression lipogener und glykolytischer Gene koppelt. Nach metabolischen Signalen arbeitet ChREBP mit Kofaktoren wie MLX zusammen, um Promotoren zu regulieren, die Carbohydrate-Response-Elemente enthalten, und verbindet so Nährstoffsensorik mit der transkriptionellen Steuerung des Leber- und Fettgewebsstoffwechsels. Diese regulatorische Achse trägt zu Signalwegen bei, die die de-novo-Lipogenese, die Triglyceridsynthese und die Glukosehomöostase steuern, und verknüpft die ChREBP-Aktivität mit metabolischer Umprogrammierung unter Bedingungen eines Nährstoffüberschusses. Eine dysregulierte MLXIPL/ChREBP-Signalkaskade wurde mit Insulinresistenz, Fettleber-Phänotypen und umfassenderen kardiometabolischen Krankheitsmechanismen in Verbindung gebracht und stellt damit einen relevanten Knotenpunkt für die Untersuchung metabolischer Gennetzwerke dar.

ChREBP Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des MLXIPL-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von MLXIPL abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die MLXIPL-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit MLXIPL-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.