Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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choactase Double Nickase Plasmid (h): sc-401333-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das choactase Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- choactase Double-Nickase-Plasmid (h) und choactase Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CHAT abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: choactase: sc-55557
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
choactase Double Nickase Plasmid (h) | sc-401333-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
choactase Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401333-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Humanes CHAT kodiert die Cholinacetyltransferase, das Enzym, das die Biosynthese von Acetylcholin aus Cholin und Acetyl‑CoA katalysiert und damit die cholinerge Neurotransmission im zentralen und peripheren Nervensystem unterstützt. Die CHAT-Aktivität verknüpft den zellulären Acetyl‑CoA‑Stoffwechsel mit der Beladung synaptischer Vesikel und der regulierten Freisetzung von Neurotransmittern und beeinflusst so die neuronale Erregbarkeit sowie die neuromuskuläre Signalübertragung. Eine veränderte cholinerge Tonuslage und eine Dysregulation von CHAT wurden im Zusammenhang mit Neurodegeneration, kognitiven Beeinträchtigungen sowie Motoneuron- und neuromuskulären Erkrankungen untersucht, bei denen die Verfügbarkeit von Acetylcholin die Funktion und Plastizität neuronaler Schaltkreise prägt. Als Marker cholinerger Identität wird CHAT широко eingesetzt, um Differenzierungsprogramme, synaptische Physiologie und die Regulation von Neurotransmitterwegen zu untersuchen.
choactase Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CHAT-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CHAT abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CHAT-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CHAT-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.