Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
cHMGCS Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-417181
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- cHMGCS El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico cHMGCS, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: cHMGCS Anticuerpo (A-6): sc-166763
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
cHMGCS Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-417181 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
HMGCS1 codifica la 3-hidroxi-3-metilglutaril-CoA sintasa citosólica (cHMGCS), una enzima clave de la vía del mevalonato que cataliza la formación de HMG-CoA a partir de acetoacetil-CoA y acetil-CoA. Este paso sustenta la biosíntesis de esteroles e isoprenoides, vinculando la disponibilidad celular de acetil-CoA con la producción de colesterol y la señalización dependiente de la prenilación. La actividad de HMGCS1 está estrechamente integrada con los programas de homeostasis lipídica y la regulación por retroalimentación de la expresión génica metabólica, influyendo en la biogénesis de membranas y el equilibrio redox. La desregulación del flujo de la vía del mevalonato se ha asociado con alteraciones de la proliferación, respuestas al estrés metabólico y fenotipos relevantes para la investigación de enfermedades cardiovasculares y neurodegenerativas.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO cHMGCS (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen HMGCS1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del HMGCS1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de HMGCS1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína cHMGCS.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en HMGCS1 para la investigación de la señalización de cHMGCS, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de HMGCS1 críticos para la función de cHMGCS
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de HMGCS1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido cHMGCS CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido cHMGCS CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus HMGCS1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR cHMGCS (h) y el plásmido HDR cHMGCS (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología HMGCS1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana HMGCS1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.