Plásmido Doble Nickase (h) Chk2: sc-400438-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Chk2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Chk2 (h) y el plásmido de doble nickasa Chk2 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CHEK2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Chk2 Anticuerpo (A-11): sc-17747
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Chk2 | sc-400438-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Chk2 | sc-400438-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CHEK2 codifica la quinasa de control del ciclo 2 (Chk2), una quinasa de serina/treonina que se activa aguas abajo de ATM en respuesta a roturas de doble hebra del ADN. Tras su fosforilación, Chk2 propaga la señalización del daño en el ADN para regular los puntos de control del ciclo celular, la coordinación de la reparación del ADN y la apoptosis mediante sustratos como p53, las fosfatasas CDC25 y BRCA1. Esta vía integra señales de estrés genómico con el control de la replicación para preservar la integridad del genoma durante la fase S y la mitosis. La señalización desregulada de CHEK2/Chk2 y las variantes heredadas o adquiridas se han asociado con fenotipos de inestabilidad genómica y susceptibilidad al cáncer, lo que la convierte en un nodo ampliamente utilizado para estudiar los circuitos de respuesta al daño del ADN.
Chk2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CHEK2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CHEK2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CHEK2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CHEK2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.