CHD8 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-426734

Descripción general

Chd8 codifica la proteína de unión al ADN helicasa con dominio cromado 8 (CHD8), un remodelador de la cromatina dependiente de ATP que regula el posicionamiento de los nucleosomas y los programas transcripcionales durante el desarrollo. CHD8 influye en la accesibilidad de potenciadores y promotores, vinculando la arquitectura de la cromatina con el control del ciclo celular, la diferenciación neuronal y las salidas transcripcionales asociadas a Wnt/β-catenina. En sistemas murinos, Chd8 se utiliza ampliamente para investigar mecanismos del neurodesarrollo y redes de regulación génica, ya que la alteración de la dosis de CHD8 se ha relacionado con biología asociada al trastorno del espectro autista en estudios genéticos y funcionales. Estas propiedades convierten a CHD8 en un nodo clave para estudiar el control de la especificación de linaje mediado por la cromatina y la homeostasis transcripcional.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CHD8 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Chd8 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Chd8 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Chd8 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CHD8.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Chd8 para la investigación de la señalización de CHD8, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Chd8 críticos para la función de CHD8
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Chd8 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CHD8 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido CHD8 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Chd8. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CHD8 (m) y el plásmido HDR CHD8 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Chd8 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Chd8 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.