CHCHD6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-425817

Übersicht

Chchd6 kodiert CHCHD6, ein Coiled-Coil-Helix–Coiled-Coil-Helix-Domänenprotein, das in Mitochondrien angereichert ist und dort die Organisation der inneren Mitochondrienmembran sowie die Crista-Architektur unterstützt. CHCHD6 wurde mit Prozessen des mitochondrial contact site and cristae organizing system (MICOS) in Verbindung gebracht, die Membrankrümmung, den Aufbau der Atmungskette und die mitochondriale Dynamik koordinieren. Über diese Funktionen beeinflusst CHCHD6 die Effizienz der oxidativen Phosphorylierung, das Gleichgewicht reaktiver Sauerstoffspezies und die mitochondriale Stresssignalgebung, was sich auf Zellüberleben und Differenzierungsprogramme auswirken kann. Eine Dysregulation der mitochondrialen Ultrastruktur und der bioenergetischen Homöostase ist relevant für Modelle der Neurodegeneration, kardiometabolischer Dysfunktion und anderer Erkrankungen, bei denen die mitochondriale Integrität ein zentraler experimenteller Endpunkt ist.

Das CHCHD6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Chchd6-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Chchd6-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Chchd6 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CHCHD6-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Chchd6-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CHCHD6-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Chchd6-Exone abzielen, die für die CHCHD6-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Chchd6-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CHCHD6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom CHCHD6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Chchd6-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CHCHD6 HDR-Plasmid (m) und CHCHD6 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Chchd6-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Chchd6-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.