Plasmide CRISPR/Cas9 KO Cerebellin 1 (h): sc-407032

Présentation

CBLN1 code la cérébelline 1, une glycoprotéine sécrétée enrichie dans le système nerveux central, qui agit comme organisateur synaptique en soutenant la formation et le maintien des synapses excitatrices. La cérébelline 1 participe à des complexes d’adhérence trans-synaptiques qui couplent les spécialisations présynaptiques et postsynaptiques, façonnant la connectivité synaptique et la neurotransmission dans le cervelet et les circuits apparentés. Grâce à ces interactions, elle influence le développement neuronal, la plasticité synaptique et les processus de raffinement des circuits, essentiels à la coordination motrice et à l’apprentissage. Une expression altérée de CBLN1 ou une désorganisation de l’architecture synaptique médiée par les cérébellines a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques des synaptopathies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Cerebellin 1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CBLN1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CBLN1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CBLN1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Cerebellin 1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CBLN1 pour l'étude de la signalisation de Cerebellin 1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CBLN1 essentiels à la fonction de Cerebellin 1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CBLN1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Cerebellin 1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Cerebellin 1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CBLN1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Cerebellin 1 plasmide HDR (h) et le Cerebellin 1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CBLN1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CBLN1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.