CEP70 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406527

Panoramica

CEP70 (proteina centrosomiale 70) è un fattore associato al centrosoma implicato nella maturazione del centrosoma e nell’organizzazione dei microtubuli durante la progressione del ciclo cellulare. Sostenendo l’architettura centrosomiale e la funzione del fuso mitotico, CEP70 contribuisce a un ingresso efficiente in mitosi, alla segregazione dei cromosomi e al mantenimento della polarità cellulare. L’alterazione delle reti di regolazione del centrosoma e dei microtubuli è associata a instabilità genomica e a una capacità proliferativa modificata, rendendo CEP70 rilevante per studi sulla fedeltà mitotica e sul controllo del citoscheletro. Una funzione centrosomiale deregolata e dinamiche anomale del fuso sono frequentemente osservate in contesti oncologici, collocando CEP70 come un nodo utile per indagare i meccanismi che collegano l’omeostasi del centrosoma alla proliferazione cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CEP70 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CEP70 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CEP70 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CEP70 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CEP70.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CEP70 per lo studio della segnalazione di CEP70, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CEP70 critici per la funzione di CEP70
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CEP70 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CEP70 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CEP70 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CEP70. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CEP70 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CEP70 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CEP70 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CEP70 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.