CEP70 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406527

Übersicht

CEP70 (zentrosomales Protein 70) ist ein zentrosomenassoziierter Faktor, der an der Zentrosomenreifung und der Organisation von Mikrotubuli während der Zellzyklusprogression beteiligt ist. Durch die Unterstützung der Zentrosomenarchitektur und der Spindelfunktion trägt CEP70 zu einem effizienten Eintritt in die Mitose, zur Chromosomentrennung und zur Aufrechterhaltung der zellulären Polarität bei. Störungen der Zentrosomen- und Mikrotubuli-Regulationsnetzwerke sind mit genomischer Instabilität und einer veränderten Proliferationsfähigkeit verbunden, wodurch CEP70 für Studien zur mitotischen Genauigkeit und zur Kontrolle des Zytoskeletts relevant ist. Eine dysregulierte Zentrosomenfunktion und veränderte Spindeldynamik werden häufig in krebsbezogenen Kontexten beobachtet, was CEP70 zu einem nützlichen Ansatzpunkt macht, um Mechanismen zu untersuchen, die die Zentrosomenhomöostase mit der Zellproliferation koppeln.

Das CEP70 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CEP70-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CEP70-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CEP70 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CEP70-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CEP70-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CEP70-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CEP70-Exone abzielen, die für die CEP70-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CEP70-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CEP70 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom CEP70 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CEP70-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CEP70 HDR-Plasmid (h) und CEP70 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CEP70-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CEP70-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.