CEP70 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406527

Descripción general

CEP70 (proteína centrosomal 70) es un factor asociado al centrosoma implicado en la maduración del centrosoma y en la organización de los microtúbulos durante la progresión del ciclo celular. Al sostener la arquitectura centrosomal y la función del huso, CEP70 contribuye a una entrada mitótica eficiente, a la segregación cromosómica y al mantenimiento de la polaridad celular. La alteración de las redes reguladoras del centrosoma y de los microtúbulos se asocia con inestabilidad genómica y cambios en la capacidad proliferativa, lo que hace que CEP70 sea relevante para estudios sobre la fidelidad mitótica y el control del citoesqueleto. La disfunción del centrosoma y la dinámica anómala del huso se observan con frecuencia en contextos relacionados con el cáncer, lo que posiciona a CEP70 como un nodo útil para investigar mecanismos que conectan la homeostasis del centrosoma con la proliferación celular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CEP70 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CEP70 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CEP70 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CEP70 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CEP70.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CEP70 para la investigación de la señalización de CEP70, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CEP70 críticos para la función de CEP70
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CEP70 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CEP70 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CEP70 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CEP70. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CEP70 (h) y el plásmido HDR CEP70 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CEP70 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CEP70 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.