CEP192 Lentiviral Activation Particles (h2): sc-406971-LAC-2

Das humane Gen CEP192 kodiert ein centrosomales Gerüstprotein, das für die Reifung des Centrosoms und die Aktivität des mikrotubuli-organisierenden Zentrums (MTOC) essenziell ist, indem es die Rekrutierung des pericentriolären Materials koordiniert und während der Mitose den korrekten Aufbau einer bipolaren Spindel fördert. CEP192 wirkt in zentralen Signalwegen der Centrosomenduplikation und der Zellzykluskontrolle und interagiert dabei mit Regulatoren wie PLK1 und AURKA, um die Mikrotubuli-Nukleation und den mitotischen Fortschritt zu unterstützen. Eine Fehlregulation oder Mutation von CEP192 wurde mit chromosomaler Instabilität und einer aberranten Centrosomenzahl in Verbindung gebracht, Merkmale, die mit Entwicklungsstörungen und krebsassoziierten proliferativen Phänotypen verknüpft sind. Das Gene-Editing von CEP192 ermöglicht mechanistische Untersuchungen der Centrosomenbiologie, der Integrität des Spindelkontrollpunkts und der Genomstabilität in Zellmodellen, einschließlich Live-Cell-Imaging und proteomischer Kartierung centrosomaler Komplexe.

CEP192 Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente CEP192-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

CEP192 Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der CEP192-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen CEP192-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen CEP192-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.