CEP192 Particelle di Attivazione Lentivirale (h2): sc-406971-LAC-2

Il gene umano CEP192 codifica una proteina di impalcatura centrosomiale essenziale per la maturazione del centrosoma e per l’attività del centro organizzatore dei microtubuli (MTOC), coordinando il reclutamento del materiale pericentriolare e promuovendo la corretta formazione del fuso bipolare durante la mitosi. CEP192 opera nei principali circuiti di duplicazione del centrosoma e di controllo del ciclo cellulare, interagendo con regolatori quali PLK1 e AURKA per sostenere la nucleazione dei microtubuli e la progressione mitotica. La deregolazione o le mutazioni di CEP192 sono state associate a instabilità cromosomica e a un numero anomalo di centrosomi, caratteristiche collegate a disturbi dello sviluppo e a fenotipi proliferativi correlati al cancro. L’editing genetico di CEP192 consente studi meccanicistici della biologia del centrosoma, dell’integrità del checkpoint del fuso e della stabilità del genoma mediante modelli cellulari, inclusi l’imaging in cellule vive e la mappatura proteomica dei complessi centrosomiali.

Le particelle di attivazione lentivirale CEP192 (h2) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di CEP192 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale CEP192 (h2) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione CEP192, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di CEP192. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo CEP192 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.