CEP152 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-430248

Panoramica

Cep152 codifica la proteina centrosomiale CEP152, un’impalcatura fondamentale necessaria per la biogenesi dei centrioli e la duplicazione del centrosoma nelle cellule di topo. CEP152 coopera con PLK4 e con altri fattori di assemblaggio dei centrioli per reclutare e organizzare il materiale pericentriolare, sostenendo la nucleazione dei microtubuli e la corretta formazione del fuso bipolare durante la mitosi. L’alterazione di CEP152 compromette la progressione del ciclo cellulare, induce amplificazione o perdita dei centrosomi e favorisce l’instabilità genomica attraverso difetti nell’assemblaggio del fuso e nella segregazione dei cromosomi. Questi processi collegano CEP152 a vie spesso studiate nella biologia dello sviluppo, nella neurogenesi e in meccanismi rilevanti per il cancro che coinvolgono la fedeltà mitotica e le risposte al danno del DNA.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CEP152 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Cep152 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Cep152 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Cep152 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CEP152.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Cep152 per lo studio della segnalazione di CEP152, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Cep152 critici per la funzione di CEP152
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Cep152 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CEP152 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CEP152 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Cep152. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CEP152 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CEP152 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Cep152 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Cep152 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.