Centriolin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404195

Descripción general

CNTRL codifica la centriolina, una proteína de andamiaje asociada al centrosoma y al cuerpo medio, necesaria para la maduración del centrosoma, la progresión mitótica y la finalización de la citocinesis. La centriolina favorece el reclutamiento y la organización de complejos proteicos en el centríolo madre y en el cuerpo medio, coordinando estructuras basadas en microtúbulos que garantizan el correcto funcionamiento del huso mitótico y la abscisión. La alteración de CNTRL puede perturbar la homeostasis del centrosoma, provocar fallos de citocinesis y promover la inestabilidad cromosómica, procesos relevantes para el estudio de la aneuploidía y el estrés proliferativo en modelos celulares humanos. Por lo tanto, CNTRL es un nodo útil para investigar la regulación del centrosoma, los puntos de control del ciclo celular y el control del plano de división.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Centriolin (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CNTRL en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CNTRL junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CNTRL tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Centriolin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CNTRL para la investigación de la señalización de Centriolin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CNTRL críticos para la función de Centriolin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CNTRL para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Centriolin CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Centriolin CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CNTRL. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Centriolin (h) y el plásmido HDR Centriolin (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CNTRL para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CNTRL definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.