CELSR1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405564-ACT

CELSR1 (cadherin EGF LAG seven-pass G-type receptor 1) codifica un GPCR di adesione atipico che funge da componente centrale del macchinario della polarità planare delle cellule (PCP). Attraverso ripetizioni extracellulari di cadherina e interfacce di segnalazione intracellulari, CELSR1 coordina comportamenti cellulari direzionali, l’organizzazione epiteliale e dinamiche citoscheletriche polarizzate durante lo sviluppo e il rimodellamento dei tessuti. Interagisce funzionalmente con la segnalazione WNT/PCP non canonica e coopera con proteine come VANGL e FZD per regolare la divisione cellulare orientata e la migrazione collettiva. Un’attività o un’espressione disregolata di CELSR1 è stata associata a difetti dello sviluppo e a un patterning tissutale aberrante, e l’alterazione della segnalazione PCP è spesso studiata in contesti di invasione, morfogenesi e integrità della barriera.

CELSR1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CELSR1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CELSR1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CELSR1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CELSR1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CELSR1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CELSR1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CELSR1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CELSR1 nelle cellule tumorali con espressione di CELSR1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.