Plásmido Doble Nickase (h) CEL: sc-403176-NIC

El gen humano **CEL** codifica la lipasa éster carboxílica, una glicoenzima secretada conocida principalmente por hidrolizar ésteres de colesterol y triglicéridos de la dieta, contribuyendo así a la absorción intestinal de lípidos. La actividad de CEL se integra en las vías de manejo lipídico al modular el conjunto de colesterol libre, ácidos grasos y monoacilglicéridos disponibles para el ensamblaje de lipoproteínas y la señalización metabólica posterior. En el páncreas exocrino, CEL forma parte del repertorio de enzimas digestivas y puede influir en la composición de ligandos derivados de lípidos que modulan respuestas inflamatorias y metabólicas. Alteraciones en la función o la expresión de CEL se han asociado con desregulación del metabolismo lipídico y con fenotipos pancreáticos o metabólicos, lo que la convierte en un objetivo relevante para estudios mecanísticos sobre la digestión de lípidos, la biología de la secreción y el estrés metabólico asociado a enfermedades.

CEL El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CEL en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CEL. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CEL. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CEL alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.