Plásmido CRISPR de Activación (h) Cdx1: sc-402522-ACT

CDX1 codifica el factor de transcripción homeobox tipo caudal Cdx1, un regulador de unión al ADN específico de secuencia que ayuda a establecer el patrón anteroposterior y guía la diferenciación del epitelio intestinal. En células humanas, CDX1 se integra con redes de señalización del desarrollo como Wnt/β-catenina y programas transcripcionales sensibles al ácido retinoico para controlar la expresión génica restringida por linaje y la maduración epitelial. La alteración de la expresión de CDX1 se ha asociado con cambios en el destino epitelial y estados de diferenciación desregulados en tejidos gastrointestinales, lo que lo convierte en un recurso molecular útil para estudiar la reprogramación transcripcional en modelos relevantes para enfermedad. Como regulador homeobox, Cdx1 también se utiliza para investigar cómo los elementos cisreguladores y el contexto de la cromatina moldean las decisiones de identidad celular.

Cdx1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CDX1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Cdx1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CDX1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CDX1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Cdx1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CDX1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Cdx1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Cdx1 en células tumorales con expresión de CDX1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.